一、技术原理

BeNano静态流动模式通过与凝胶渗透色谱（SEC/GPC）联用，实现对生物大分子（如单克隆抗体IgG）的精准分离与绝对分子量测定。其工作流程如下：

1. 分离阶段：SEC色谱柱（如TSK氧化硅柱）根据流体力学体积分离样品组分，由示差折光（RI）或紫外（UV）检测器记录流出峰。

2. 检测阶段：

• BeNano在90°角收集静态光散射（SLS）信号，结合RI/UV信号计算绝对分子量（无需标准曲线）。

• 基于瑞利散射理论，当分子尺寸＜激光波长（671nm）的1/40（约17nm）时，结果准确性高，特别适用于蛋白质分析。

  
  

二、实验系统与方法

设备配置：

• 前端SEC：主流品牌SEC系统，配备RI检测器。

• 光散射检测：BeNano 180 Zeta Max，激光波长671nm（50mW），使用27μL低容量流通池。

• 信号同步：BFC-1信号采集器同步RI与SLS数据。

样品与条件：

• 样品：IgG单抗（5mg/mL，pH 7.0 PBS缓冲液）。

• 进样量：100μL，流速0.7mL/min。

• 温度：25℃（与室温一致）。

三、结果与讨论

1. 分离与分子量测定
IgG样品经SEC分离后呈现多峰结构（图1），表明存在不同聚集态。通过SLS-RI联用分析，得到各峰分子量（表1）：

2. 关键发现

• 分子量-流出体积关系：分子量随SEC流出体积增加而递减（图2），符合尺寸排阻原理。

• 峰内均一性：各峰内分子量呈平台分布，表明每种聚集态分子量分布极窄。

• 风险提示：团聚体总含量＞24.2%，可能引发免疫原性风险，需严格监控药物工艺。

四、技术优势与应用价值

1. 绝对分子量测定：
   SLS技术无需标样，直接获取绝对分子量，避免传统SEC的校准偏差。

2. 高分辨聚集态分析：
   可清晰识别单体、二聚体、三聚体等聚集状态，并量化其比例。

3. 生物药品质控意义：

• 团聚体影响药物安全性和疗效（如引发免疫反应）。

• 本方法为单抗药物的工艺优化和质量控制提供关键数据支持。

结论

BeNano静态流动模式与SEC的联用技术，可高效、精准地表征单抗IgG的分子量分布及聚集状态。该方案尤其适用于生物制药领域，为减少药物免疫原性风险、提升产品稳定性提供科学依据。